穩(wěn)轉(zhuǎn)

導(dǎo)入的DNA沒有整合到基因組中，而是保留在細(xì)胞核上

導(dǎo)入的DNA整合到基因組中

導(dǎo)入的遺傳物質(zhì)不傳遞到子代； 遺傳改變只是暫時的

導(dǎo)入的遺傳物質(zhì)能夠代代相傳；遺傳改變是*的

不需要選擇性篩選

需要選擇性篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞

DNA載體和RNA都可用于瞬時轉(zhuǎn)染

只有DNA載體可用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染；RNA本身不能穩(wěn)定地導(dǎo)入細(xì)胞中

導(dǎo)入的遺傳物質(zhì)的高拷貝數(shù)導(dǎo)致高水平的蛋白質(zhì)表達。

單拷貝數(shù)或低拷貝數(shù)的穩(wěn)定整合的DNA導(dǎo)致較低水平的蛋白質(zhì)表達。

通常在轉(zhuǎn)染后24-96小時內(nèi)收獲細(xì)胞。

需要2-3周的時間篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞克隆。

通常不適合使用具有誘導(dǎo)型啟動子的載體的研究。

適用于使用帶有誘導(dǎo)型啟動子的載體的研究。

轉(zhuǎn)染方法

原理

應(yīng)用

特點

磷酸鈣法

磷酸鈣DNA復(fù)合物吸附細(xì)胞膜被細(xì)胞內(nèi)吞

穩(wěn)轉(zhuǎn)，

瞬轉(zhuǎn)

不適用于原代細(xì)胞，操作簡便但重復(fù)性差，有些細(xì)胞不適用

陽離子
脂質(zhì)體法

帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞

穩(wěn)轉(zhuǎn)，

瞬轉(zhuǎn)
所有細(xì)胞

適用性廣，轉(zhuǎn)染效率高，重復(fù)性好，但轉(zhuǎn)染時需除血清。轉(zhuǎn)染效果隨細(xì)胞類型變化大

DEAE-右旋糖苷法

帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負(fù)電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞

瞬轉(zhuǎn)

相對簡便、結(jié)果可重復(fù)，但對細(xì)胞有一定的毒副作用，轉(zhuǎn)染時需除血清

病毒介導(dǎo)法

通過侵染宿主細(xì)胞將外源基因整合到染色體中

穩(wěn)轉(zhuǎn)

可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、原代細(xì)胞，體內(nèi)細(xì)胞等

逆轉(zhuǎn)錄病毒

特定宿主

但攜帶基因不能太大細(xì)胞需處分裂期，需考慮安全因素

腺病毒

通過侵染宿主細(xì)胞將外源基因整合到染色體中

瞬時轉(zhuǎn)染
特定宿主

可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞
需考慮安全因素

Biolistic顆粒傳遞法

將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀，再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細(xì)胞，DNA在胞內(nèi)逐步釋放表達

瞬轉(zhuǎn)

可用于：人的表皮細(xì)胞，纖維原細(xì)胞，淋巴細(xì)胞系以及原代細(xì)胞

電穿孔法

高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜電位，DNA通過膜上形成的小孔導(dǎo)入

穩(wěn)轉(zhuǎn)，瞬轉(zhuǎn)
所有細(xì)胞

適用性廣但細(xì)胞致死率高，DNA和細(xì)胞用量大

顯微注射法

用顯微操作將DNA直接注入靶細(xì)胞核

穩(wěn)轉(zhuǎn)，瞬轉(zhuǎn)

轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)有限，多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動物的胚胎細(xì)胞